一、沙門菌的檢驗
沙門菌廣泛存在于自然界中，是重要的腸道致病菌，可引起傳染和流行。沙門菌屬是一群符合腸桿菌科定義并與其血清學(xué)相關(guān)的革蘭陰性、需氧性、無芽孢桿菌。本菌屬種類繁多，抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)2000多個血清型，我國已發(fā)現(xiàn)血清型近200個。形態(tài)特征：革蘭陰性，大小為（1～3）um×（0.4～0.9）um的兩端鈍圓的短桿菌，無芽孢，一般無莢膜，除雞沙門菌和雛沙門菌以外，均周身有鞭毛，運動力強。培養(yǎng)特性：沙門菌需氧或兼性厭氧，10～42℃都可生長，最適生長溫度為37℃，最適pH為6.8～7.8。營養(yǎng)瓊脂平板上：35～37℃培養(yǎng)18～24h，其菌落大小一般為2～3mm，光滑、濕潤、無色、半透明、邊緣整齊。血平板上：中等大小的灰白色菌落。生化特性：絕大多數(shù)沙門菌有規(guī)律地發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，但也有不產(chǎn)氣者，不發(fā)酵蔗糖和側(cè)金盞花醇，不產(chǎn)生吲哚，不分解尿素。
沙門菌的檢驗應(yīng)注意以下幾點。
① 冷凍樣品解凍需在45℃以下，于有自動調(diào)溫器自控的水浴鍋內(nèi)不斷攪拌進(jìn)行15min或在2～8℃，18h內(nèi)軟化。
② 為保證檢驗的準(zhǔn)確性，必須在選擇性培養(yǎng)基上挑取足夠數(shù)量的菌落進(jìn)行生化和血清學(xué)鑒定。進(jìn)行生化反應(yīng)時，應(yīng)以純培養(yǎng)物進(jìn)行試驗，如出現(xiàn)血清學(xué)陽性，而生化反應(yīng)特征不符合時，應(yīng)對接種物進(jìn)行純化，用純化后的培養(yǎng)物重新進(jìn)行生化試驗。
1、儀器與試劑
1）儀器
托盤天平；均質(zhì)器或乳缽；電熱培養(yǎng)箱；顯微鏡；滅菌廣口瓶；滅菌三角燒瓶；隔膜真空泵；滅菌平皿；滅菌小試管；滅菌毛細(xì)吸管；載玻片；酒精燈；滅菌金屬匙或玻璃棒；接種棒；鎳鉻絲；試管架。
2）培養(yǎng)基和試劑
緩沖蛋白胨水；氯化鎂孔雀綠（MM）增菌液；硫磺酸鈉煌綠（TTB）增菌液；亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液；亞硫酸鉍瓊脂（BS）；DHL瓊脂；HE瓊脂；SS瓊脂；三糖鐵（TSI）瓊脂；蛋白胨水；尿素瓊脂；氰化鉀（KC）培養(yǎng)基；氨基酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基；糖發(fā)酵管；緩沖葡萄糖蛋白胨；丙二酸鈉培養(yǎng)基；氧化酶試劑；革蘭染色液；沙門菌因子血清。
2、常規(guī)檢驗方法
1. 樣品的采集及處理
應(yīng)采集可疑食品或可疑帶菌者的新鮮糞便進(jìn)行檢驗。檢查帶菌者時也可用肛拭取樣（經(jīng)干熱無菌的棉拭先用保存液或增菌液濕潤，深入肛門內(nèi)7～10cm處采樣）。樣品若不能及時檢驗，應(yīng)將樣品放入保存液中，置40℃的冰箱內(nèi)保存。
2. 增菌培養(yǎng)
（1）前增菌 對于經(jīng)過烘烤加熱或冷凍的食品樣品，食品中的沙門菌由于加工過程中受到“致傷”而處于瀕死狀態(tài)。故為了分離出食品中的沙門菌，必須對加工過的食品進(jìn)行前增菌，使沙門菌恢復(fù)其活力。
（2）增菌 其目的是使沙門菌以外的細(xì)菌（主要是埃希菌屬）受到抑制，而使沙門菌得到一定的增殖，提高沙門菌的檢出率。
鮮肉、鮮蛋、鮮乳或其他未經(jīng)加工的食品和原料，不必經(jīng)過前增菌各取上述檢樣25g（或25mL）加入盛有滅菌生理鹽水25mL的錐形瓶中，制成均勻樣液，取半量接種于100mL氯化鎂孔雀綠（MM）增菌液或四硫磺酸鈉煌綠（TTB）增菌液內(nèi)，于42℃培養(yǎng)24h；另取半量接種于100mL亞硒酸鹽胱氨酸增菌液內(nèi)于36℃±1℃培養(yǎng)18～24h，增菌培養(yǎng)基的效果應(yīng)先加以測定，而且還應(yīng)考慮到如果增菌的目的菌是傷寒沙門菌，應(yīng)以37℃為佳，而其他沙門菌則以42℃為佳。
3. 分離培養(yǎng)
取增菌液一環(huán)，劃線接種于沙門菌選擇性培養(yǎng)基上，如亞硫酸鉍瓊脂（BS）、DHL瓊脂、HE瓊脂、SS瓊脂。兩種增菌液可同時劃線接種在同一個平板上，于36℃±1℃分別培養(yǎng)18～24h（DHL，HE，SS）或40～48h（BS），觀察各種平板上生長菌落的特征。
4. 生化試驗
挑取上述選擇性瓊脂平板上的可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂斜面（先涂布斜面，后穿制底層），一般應(yīng)多挑幾個菌落，以防遺漏。在三糖鐵瓊脂斜面內(nèi)，只有斜面產(chǎn)酸并同時硫化氫（H2S）陰性的菌株可以排除，其他反應(yīng)結(jié)果均有沙門菌存在的可能，同時也均有不是沙門菌的可能，因此都需要做幾項最低限度的生化試驗，必要時做涂片染色鏡檢應(yīng)為革蘭陰性短桿菌，做氧化酶試驗應(yīng)為陰性。在接種三糖鐵瓊脂的同時，再接種蛋白陳水（供做基質(zhì)試驗）、尿素瓊脂（pH7.2）、氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基及對照培養(yǎng)基各一管，于36℃±1℃培養(yǎng)18～24h，必要時可延長到48h。
5. 血清學(xué)分型鑒定
（1）抗原的準(zhǔn)備
一般采用1.5％瓊脂斜面培養(yǎng)物作為玻片凝集試驗用的抗原。O血清不凝集時，將菌株接種在瓊脂量較高的（如2.5％～3％）培養(yǎng)基上再檢查；如果是由于Vi抗原的存在而阻止了O凝集反應(yīng)時，可挑取菌苔于1mL生理鹽水中做成濃菌液，于酒精燈火焰上煮沸后再檢查。
H抗原發(fā)育不良時，將菌株接種在0.7％～08％半固體瓊脂平板的中央，待菌落蔓延生長時，在其邊緣部分取菌檢查；或?qū)⒕晖ㄟ^裝有0.3％～0.4％半固體瓊脂的小玻璃管1～2次，自遠(yuǎn)端取菌培養(yǎng)后再檢查。
（2）O抗原的鑒定
用A-F多價O血清做玻片凝集試驗，同時用生理鹽水對照。在生理鹽水中自凝者為粗糙型菌株，不能分型。被A～F多價O血清凝集者，依次用O4、03、010、O7、O8、O9、O2和O11因子血清做凝集試驗。根據(jù)試驗結(jié)果，判定O群被O3、10因子血清凝集的菌株，再用O10、O15、O34、O19單因子血清做凝集試驗，判定E1、E2、E3、E4各亞群，每一個O抗原成分的最后確定均應(yīng)根據(jù)O單因子血清的檢查結(jié)果，沒有單因子血清的要用兩個O復(fù)合因子血清進(jìn)行核對。不被A～F多價O血清凝集者，先用57種或144種沙門菌因子血清中的7多價O血清檢查，如有其中一種血清凝集，則用這種血清所包括的O群血清逐一檢查，以確定O群。
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